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VP试验

VP试验由Voges和Proskauer两位学者创建,故有此学名。它是微生物检验中常用的生化反应之一。其原理为:某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸,并进一步将丙酮酸脱羧成为乙酰甲基甲醇,后面在碱性环境下被空气中的氧氧化成为二乙酰,进而与培养基中的精氨酸等所含的胍基结合,形成红色的化合物,即VP试验阳性。

1.葡萄糖蛋白胨水培养基成分:多价蛋白胨7g、葡萄糖5g、磷酸氢二钾5g、蒸馏水1000ml,pH 7.2。

2.制备:将上述成分混合溶解后,分装于小试管,115℃高压灭菌15 min。

3.试剂:甲液为6%a萘酚乙醇溶液;乙液为40%氢氧化钾溶液。

1.O’Meara氏法:将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养48h,培养液1ml加O’Meara试剂(加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液)1ml,摇动试管1~2min,静置于室温或36±1°C恒温箱,若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。

2.Barritt氏法:将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Cα萘酚(2-na-phthol)纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml,摇动2~5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置于室温或36±1°C恒温箱,如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。

3.快速法:将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后放置5min,判定结果。不产酸的培养物不能使用。

大肠埃希菌ATCC 25922为无红色出现,肺炎克雷伯菌ATCC 13883为红色 。

呈红色者为阳性 。

1.许多实验室工作人员有一个错误的印象,即VP试验阳性菌甲基红试验自然是阴性,或反之亦然。实际上,肠杆菌科的大多数细菌产生相反的反应(由于乙酰甲基甲醇形成碱性,导致甲基红试验阴性和VP试验阳性)。某些细菌如蜂房哈夫尼菌和奇异变形杆菌35℃培养可产生甲基红试验和VP试验同时阳性反应,后者常延迟出现。

2.a萘酚乙醇溶液易失效,试剂放室温Ⅱ音处可保存1个月。氢氧化钾溶液可长期保存。国内多采用贝氏法 。

本试验常与甲基红试验一起使用,因为前者为阳性的细菌,后者通常为阴性,反之亦大肠埃希菌、沙门菌等甲基红试验呈阳性反应,而VP试验则为阴性;相反,如沙雷菌、阴VP试验阳性,而甲基红试验为阴性 。

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